人抗體ELISA試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被病毒性腹瀉病毒抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標儀在450NM波長下測定吸光度(OD值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬病毒性腹瀉病毒(BVDV)的存在與否。

　　方法類型和操作步驟：間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：

　?、艑⑻禺愋钥乖c固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質(zhì)。

　?、萍酉♂尩氖軝z血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。

　?、羌用笜丝箍贵w：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

　　⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

　　本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。

　　人抗體ELISA試劑盒的用途

　　ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。